一、4T1细胞培养,小鼠乳腺癌细胞培养策略

4T1细胞，源自410.4瘤株，是乳腺癌研究和药物筛选的常用模型。该细胞在显微镜下呈上皮细胞形态，不表达雌激素受体（ER）、孕酮受体（PR）和人表皮生长因子受体-2（Her-2）。当注入BALB/C小鼠体内，4T1细胞能自发形成高转移性肿瘤，原位生长并转移至肺、肝、淋巴结和大脑，其转移玩法和临床乳腺癌患者相似，使其成为人乳腺癌同源模型。

4T1细胞运用RPMI-1640培养基培养，含有10%胎牛血清，在37度、5% CO2的培养箱中培养。细胞生长旺盛，融合度达到70-80%即可传代，避免超过90%再传代，以防影响细胞情形。传代主推比例为1:4至1:6，并用胰酶消化细胞，消化时刻约37℃下2-3分钟。

运用4T1细胞培养时，请注意下面内容事项：

1. 4T1细胞的原发肿瘤及其转移玩法和人类乳腺癌临床病程高度相似。

2. 4T1细胞致瘤性强，具有侵袭性，能自发转移到远处器官。

3.细胞融合度达到70-80%时即可传代，切勿超过90%，以免影响细胞情形。

4.传代主推比例为1:4至1:6。

遵循这些指导，无论兄弟们将能成功培养4T1小鼠乳腺癌细胞，为乳腺癌研究和药物筛选提供有力支持。

二、AML12细胞培养,小鼠正常肝细胞培养策略

AML12细胞，源于携带人TGF-α基因的转基因小鼠（CD1株，MT42系）的肝细胞，是研究肝脏疾病进步的理想模型。这种细胞属于原代永生化，贴壁生长，上皮细胞样，形态多角形，直径约20-30um，电镜下展现出典型的肝细胞特征，如过氧化物酶体和胆管状结构。

AML12细胞高表达血清蛋白，包括白蛋白、α- 1抗胰蛋白酶和转铁蛋白的mRNA水平，同时仅表达乳酸脱氢酶的同工酶5。肝特异性蛋白的表达随培养时刻的延长而降低，但通过无血清培养基中生长细胞可从头激活。细胞经过了种属鉴定，确保无误，而且支原体检测呈阴性。

主推运用DMEM培养基培养AML12细胞，提议组合10%胎牛血清。换新培养基的频率为每周2-3次，传代时采用比例1:3至1:4，传代周期通常为2-3天。细胞传代时，室温下运用胰酶消化1-2分钟。通过这些流程，AML12细胞培养技术得以实现。

三、NIH3T3细胞培养,小鼠胚胎成纤维细胞培养策略 - 丰晖生物

寻觅细胞研究的基石：NIH3T3小鼠胚胎成纤维细胞培养宝典

在细胞生物学的殿堂中，NIH3T3，这个源自1962年美国纽约大学医学院的瑰宝，因其特殊的属性而备受科研者瞩目。它得名于其每周三次以1:3的比例进行传代，象征着其稳定的3T3分裂特性。作为Swiss 3T3，它起源于NIH/Swiss小鼠胚胎，是成纤维细胞系中的佼佼者。

NIH3T3细胞系堪称细胞永生化的典范，它在培养经过中展现出无限增殖的潜力。其中的亚克隆3T3-J2和3T3-L1分别在角质细胞和脂肪形成研究中扮演着决定因素人物。ATCC的数据显示，标准库中的NIH3T3细胞展现典型的接触抑制，但若处理不当，这种特性也许会丧失。一些细胞库中的细胞也许已经丧失了这一特性，例如ECACC，这为其在特定实验条件下提供了多样性。

NIH3T3以其对肉瘤病毒和白血病病毒的高度敏感性而闻名，这使得它在DNA转染和基因表达研究中成为不可或缺的工具。作为贴壁细胞，它们在单层中以40000个/平方厘米的密度生长，保持着良好的组织结构。这一细胞种群的特殊性还体现在其超三倍体特性，68染色体的众数体和30%的三倍体发生率，增添了研究的多样性。

虽然NIH-3T3在无胸腺小鼠体内不会引发癌变，但和特定基质蛋白结合后，它们可诱发局部侵袭性肿瘤，这为研究肿瘤生物学提供了真贵的实验模型。细胞对苯二氮卓类药物的反应以及对鼠痘病毒的阴性特性，使它们在病毒感染研究中具有重要价格。

为了保持细胞的正常生长，主推运用DMEM培养基，其中添加10%的小牛血清，而非胎牛血清，以防止过度增殖导致接触抑制性丧失。NIH3T3的倍增时刻大约为20小时，理想条件下，应以1:2至1:4的比例进行传代，每两周更换一次新鲜培养基，以维持细胞的健壮和活力。

作为研究的理想选择，NIH3T3细胞以其成纤维细胞特性，对病毒的敏感性和贴壁生长，广泛应用于DNA转染和基因表达研究。

培养时需谨慎运用小牛血清，以保持接触抑制，避免细胞过度生长。

通过适当的传代和培养条件，如20小时的倍增时刻和1:2至1:4的传代比例，可确保细胞的稳定性和研究的准确性。